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Nereus LentiHERO? | 一种提高慢病毒回收率与纯化效率的新技术

病毒载体技术的研究不断深入和发展,为遗传物质递送提供了理想的工具,成为目前细胞治疗与基因治疗的主要递送技术。然而,研究人员在细胞基因治疗产品的纯化工艺方面却面临着重大挑战。目前的纯化工艺大都来源于为单克隆抗体开发的解决方案,不适合用于病毒载体的纯化。而基于传统树脂色谱法有明显的局限性,如回收率低、耗时且成本高。 AstreAdept? 是一种新型的纳米纤维材料,可有效解决粒径大且脆弱的病毒颗粒纯化面临的耗时长、回收率低且杂质含量高等问题。在这里,我们展示了该技术整合到离心管形式的Nereus LentiHERO?,并将其优势带到实验室规模的病毒载体纯化中。 高瞬时结合表面积,更高效地处理慢病毒载体 AstreAdept?采用两种不同的电纺材料(纤维素:575nm(+/- 50 nm)和非纤维素:200nm(+/- 50 nm))交织形成特性优越的复合膜结构,可使产物溶液在高流速条件下快速扩散到高结合表面积(图1),实现无阻碍的进入孔道。将该技术整合到层析纯化基质的LentiHEROTM将慢病毒纯化带入一个新的纪元。 图1. AstreAdept? 新型的复合纳米纤维材料解决脆弱大分子纯化的瓶颈问题。 无阻碍液体流动系统优点: 结合表面积更大 高回收率 高流速 Nereus LentiHERO? 用于慢病毒纯化 图2. Nereus LentiHERO? 仅需5步离心即可实现慢病毒快速纯化 Nereus LentiHERO?显著提高慢病毒回收率 高动态结合载量与高回收率,提升实验室规模慢病毒生产效率。 图3. 15%穿透时,每根离心柱的动态结合载量1.9E+10。 Nereus LentiHERO?离心柱以20 mv/min的速度上样,流穿收集在10mL液体中,使用p24 ELISA分析,基于上样的总VP,计算VP穿透百分比。 图4. 有无血清培养体系慢病毒回收率:纯化后样品中慢病毒/病毒原液%。 血清(-) n=3,血清(+)n=2 ? 高流速条件下不影响动态结合载量 ? 保留时间 < 1s ? 无血清培养体系LV回收率>60% Nereus LentiHEROTM宿主细胞蛋白残留降低95%以上 降低HCP残留在实验室规模的样品生产同样重要,可显著减少非必要的免疫反应。 用Nereus LentiHERO?纯化的样品 ? 95% 宿主蛋白的去除 ? 通过SDS-PAGE,洗脱液中检测不到宿主蛋白 ? 不论培养体系中有无血清,都能显著去除宿主蛋白图5. Nereus LentiHEROTM可去除95% 以上宿主蛋白 Nereus LentiHEROTM对病毒结构和感染效力影响很小 Nereus LentiHERO? 纯化后的慢病毒颗粒保持了原有的功能、形态和大小 ? 重要结构蛋白完整,如编码了衣壳、基质与核衣壳的Gag蛋白 ? 慢病毒颗粒大小和形态无改变 ? 纯化后的慢病毒感染活力未降低 图6. 通过WB、电镜和细胞感染实验分别对比了Nereus LentiHERO? 纯化前后慢病毒结构蛋白的完整性、颗粒形状大小与感染活力均未受到显著影响。 Nereus LentiHEROTM兼具了产量、纯度和时间效益 ? 一台台式离心机即可实现高通量病毒纯化 ? 宿主细胞蛋白去除的同时样品洗脱体积减小(浓缩) ? 高纯度、小体积样品的进一步浓缩更节省时间 Nereus LentiHERO? 性能总结 ? 一种新型基于纳米纤维膜的AstreAdept? 技术为病毒载体纯化工艺赋能 ? 易于操作的设计,实现了功能性慢病毒颗粒的快速纯化和高回收率 ? 能显著降低如宿主细胞蛋白(HCP)等杂质的含量 ? 可以同时处理多个样品, 突破病毒载体开发样品制备的瓶颈 图7. LV 纯化高得率,高通量,高纯度,适用于小体积慢病毒样本,操作时间短。 综上所述,该技术提供了一种更具成本效益和时间效率的方案,提高研究人员对新型细胞和基因治疗项目的开发,助推新型生物治疗药物惠及广大患者。 产品信息*: 品名 货号 规格 Nereus LentiHEROTM NL100100 2 unit pack *采用相同技术适用于工艺放大的LentiHERO&reg; 1与LentiHERO&reg; 10预装柱产品已上市,欢迎咨询Astrea Bioseparations代理商全网最大下注平台。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自剑桥大学,拥有超过30年层析介质研发和生产经验,是世界级层析介质产品与服务供应商。目前使用Astrea的产品已有超过21个生产工艺通过了FDA和EMA的批准。Astrea在希腊语中是“星际少女”的意思,象征着正义、纯真、纯洁和精确。使用Astrea Bioseparations这个名字体现了我们在工作中对纯洁、精确和人性一如既往的关注。Astrea Bioseparations在全球拥有3个研发和生产基地,专注为生物大分子和CGT领域提供行业领先的层析介质和技术服务。Astrea Bioseparations推出的基于纳米纤维的新型层析技术,解决了传统生物分离工具载量低和工艺耗时问题,实现更快、更环保、更具成本效益的纯化过程,完全符合当今生物治疗创新的需求。 全网最大下注平台是Astrea Bioseparations品牌在中国的一级代理商,如您对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打全网最大下注平台客服热线400-050-4006或登录全网最大下注平台官网www.xmjsci.com查询订购。 更多>

喜大普奔!Pfanstiehl D-甘露醇(注射用)CDE登记号已激活!

“ 热烈祝贺Pfanstiehl品牌D-甘露醇(注射用/M-109-7)CDE注册登记号F20190000351已激活!”甘露醇是一种糖醇,通常由甘露糖还原而来,是山梨醇的同分异构体,易溶于水,为白色结晶性粉末,有类似蔗糖的甜味。甘露醇是一种很普遍的蛋白质冻干保护剂。甘露醇对蛋白质的保护作用与其浓度、形态结构密切相关。通常认为无定型甘露醇具有稳定蛋白质的作用而结晶态的甘露醇则失去保护功能。甘露醇的纯度对其保护蛋白质的稳定性至关重要。 Pfanstiehl品牌D-甘露醇,秉承一贯高品质理念,按照ICHQ7质量体系生 产,具有高纯度,超低内毒素,超低微生物含量的特点,并单独检测29种金属离子含量(ppb水平),符合多国药典,满足生物制药和疫苗对于注射级别甘露醇的生产要求。 产品信息: ·产品名称: D-Mannitol(Plant Derived)High Purity/Low Endotoxin-Low Metals USP/EP/JP/ChP ·中文名称:D-甘露醇·分子式:C6H14O6 ·分子量:182.17 g/mol ·CAS号:69-65-8 ·产品货号:M-109-7产品特点: ·超高纯度,超低内毒素,低微生物含量,低金属杂质残留 ·符合多国药典:USP, EP, JP, ChP ·符合ICH Q3D标准 ·符合GMP注射级标准 ·植物来源 ·美国DMF号032464 ·中国CDE登记号F20190000351已激活产品应用: ·冻干保护剂 如果您对Pfanstiehl的D-甘露醇M-109-7感兴趣,可联系Pfanstiehl中国区代理全网最大下注平台获得详细的产品概况说明文件如下。也欢迎联系获取测试样品。 美国Pfanstiehl Inc.简介: Pfanstiehl Inc.成立于1919年, 公司总部位于美国芝加哥市北郊沃吉根工业区,是美国老字号企业之一,也是一家真正的cGMP生产商。作为一家有着百年基业和沉淀的公司,Pfanstiehl Inc立志将产品质量做到极致,是全球生物制药领域超纯糖类、氨基酸类以及其他尖端分子的领先生产商,迄今已服务全球蛋白药、抗体药、疫苗、mRNA及核酸类药物等领域100年以上。Pfanstiehl Inc. 超高纯度、超低内毒素,超低金属离子含量的辅料制剂产品,全面的技术和法规审计支持,真正的cGMP质量控制体系,接受FDA的定期监察审计等都被国际知名生物制药公司所认可。Pfanstiehl Inc.是全球超高纯度、超低内毒素、超低金属离子含量等注射级糖类的领先制造商,产品生产均参照ICHQ7质量体系。自2015年进入中国市场以来,Pfanstiehl Inc.已获得13个 CDE登记号,主要产品含括海藻糖,蔗糖,D-甘露醇,组氨酸,组氨酸盐酸,精氨酸,精氨酸盐酸,琥珀酸钠,甲硫氨酸等,其中海藻糖F20170000098,甘蔗源蔗糖F20180001457和甜菜源蔗糖F20170000125, D-甘露醇F20190000351的CDE号均已激活。 Pfanstiehl Inc.于2023年又重磅推出注射级Tris和Tris HCl,这将是全球高质量的Tris和Tris HCl。作为一家有着百年历史的企业,Pfanstiehl Inc. 也在持续投资,不断扩充产品管线和扩大生产产能,以满足和支持全球生物制药行业的快速发展,特别是更好的助力中国生物制药的发展需求。全网最大下注平台为Pfanstiehl中国区代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打全网最大下注平台客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>

新品上市!大包装RevIT? AAV Enhancer,助力于AAV病毒大规模生产!

2023年7月底Mirus上市RevIT? AAV Enhancer,在不同AAV血清型别中,可提高AAV病毒基因组滴度1.2-4.9倍,并且在一定程度改善了实心率。由于可轻松的将revIT整合入现有AAV生产工艺工作流程中,不仅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN&reg; GMP 转染试剂,也适配于其他转染试(如PEI等),降低了AAV病毒上游生产成本,从而推动基因治疗单剂量成本的下降。 自RevIT? AAV Enhancer上市后,已收到来自全球客户包括知名药企、CDMO/CRO测试反馈及好评。从起初摇瓶的小规模评估阶段到500L反应器的大规模评估阶段、从使用商品化的细胞/培养基到自制细胞/培养基体系、从只局限的关注AAV病毒滴度到实心率及其他更多参数指标,RevIT的表现不断突破客户对现有体系优化的局限性。因此,也带来更多产品需求,包括推出更大的包装,以满足大规模阶段性评估。除此之外,为了满足后续临床注册或者商品化阶段GMP级别需求,Mirus计划在2024年底前推出GMP级别,以便更好的服务全球客户。 产品详情: 产品名称: RevIT? AAV Enhancer 产品规格:75mL / 瓶装 产品货号: MIR8080 上市日期:2024年1月17日 产品特点和优势: 提升AAV病毒生产的载量: RevIT? AAV Enhancer,针对不同血清型、细胞培养基、转染试剂种类,可2-4倍稳步地提高AAV病毒载量; 成本效益: 更低质粒DNA用量,降低了病毒上游的生产成本的同时,也带来了实心率/病毒质量的提升;优化了生产工艺的同时,减少了AAV病毒生产所需原料; 生产工艺整合灵活性&简便性: RevIT? AAV Enhancer可轻松的整合到您现有AAV病毒生产工艺的工作流中,灵活的加入时间点、广泛的适配性,进一步提升AAV病毒载量; 兼容性: 适配于基于单个组分的转染试剂(如PEI)或Mirus VirusGEN&reg; 转染试剂,并且AAV病毒滴度及实心率都有着不同程度的改进; 搭配 TransIT-VirusGEN&reg;性能更佳: 当与 TransIT-VirusGEN&reg;搭配使用时,整体性能上优于基于Polymer的单组份转染试剂(如PEI)。 使得基因治疗面向更多人群成为可能: 结合AAV生产上游和下游工艺的不断优化,为下一代基因疗法惠及更多患者铺平了道路。 更多RevIT? AAV Enhancer数据及RevIT? AAV Enhancer详细信息,请见微信软文《新上市RevIT? AAV Enhancer, 提高AAV产量的又一利器!》相关产品信息 产品名称 规格 货号 RevIT? AAV Enhancer 1.5 ml MIR 8000 10 x 1.5 ml MIR 8006 NEW 75 ml MIR 8080 VirusGEN&reg; AAV转染试剂及 RevIT? AAV Enhancer(套装) For 1L of Culture MIR 8007 For 10L of Culture MIR 8008 TransIT-VirusGEN&reg;转染试剂 0.3 ml MIR 6703 0.75 ml MIR 6704 1.5 ml MIR 6700 5 x 1.5 ml MIR 6705 10 x 1.5 ml MIR 6706 30 ml MIR 6720 TransIT-VirusGEN&reg; GMP级别转染试剂 150 ml MIR 6845-GMP VirusGEN&reg; AAV转染试剂(套装) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6750 VirusGEN&reg; GMP级别AAV转染试剂(套装) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6815-GMP VirusGEN&reg; LV转染试剂(套装) 1 kit for 1 L of cell culture MIR 6760 VirusGEN&reg; GMP级别LV转染试剂(套装) 1 Kit - for 50 L of cell culture MIR 6825-GMP 美国Mirus公司成立于1995年,是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的公司,同时也是目前该类试剂主要的供应商之一。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者,其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。 全网最大下注平台是Mirus中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣,欢迎致电北京全网最大下注平台客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。 更多>

Mirus全能型转染试剂:TransIT-X2?应对多种核酸/蛋白及细胞类型

基于需要递转不同种类核酸/蛋白类型研究,在细胞转染环节,研究者们常碰到如下三类问题:细胞对化学试剂较为敏感,转染后,细胞活率下降或死亡;研究常用细胞类型较多,不同类型细胞,转染效率差异较大,导致单个转染试剂或者实验流程,无法满足实验需求;递转多种类型核酸或蛋白,需要挑选对应的转染试剂,并且需要大量实验优化,才可以得到较高的转染效率。有没有一款化学转染试剂,可以同时应对常规到难转染的细胞类型,有着较低的细胞毒性,并且适用于多种核酸/蛋白类型递转呢?兼具多重功能、高性能的TransIT-X2&reg;转染试剂,可同时应对常见细胞及难转染细胞类型,避免条件摸索和大量的重复性实验,轻松得到您理想的实验结果。已验证在大多数细胞类型中(如贴壁/悬浮细胞、原代细胞、神经细胞等),都有着优异的转染效率、低毒性(特别相对于形成脂质体复合物的Lipofectamine&reg;系列试剂)、高性能的表现;适用于多种研究领域,包括但不限于干细胞研究、基因编辑CRISPR研究、RNAi基因干扰/沉默、稳转细胞株构建、低毒性的转染实验、共转染实验等;允许高效且稳定的同时递转多种核酸/蛋白类型,包括但不限于质粒 DNA、siRNA/miRNA 和 CRISPR/Cas9 组分。为什么Mirus TransIT-X2&reg; Dynamic Delivery System有着如此高性能及广泛适应性呢?这归因于Mirus强大且高效的专利递转平台设计,可进行多重、多功能组合的转染试剂组分筛选并优化。成立于1995年的Mirus,专注及深耕核酸递转领域多年(图1),从最早具有低毒性的TransIT &reg; -LT1到GMP级别、可用于AAV和LV生产的TransIT-VirusGEN&reg;,都是基于该递转平台进行设计及开发的。截至目前,使用Mirus产品发表文章已超过1万篇,并且发表文章及Mirus数据库涵盖了超过1200种细胞类型,更多文章及数据查询,请点击这里。图1 Mirus产品年鉴 不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物或阳离子脂质体),为了进一步提高转染效率,以应对不同细胞类型或特定的应用。Mirus将专利的多聚物(Polymer)及脂质(Lipids)技术进行多重组合,在不形成脂质体复合物(即liposome,通常具有细胞毒性)前提条件下,得到多种类、高性能的转染方案,克服细胞递转过程中的多重阻碍,以实现更高效转染和更低的细胞毒性(图2)。图2 Mirus转染试剂原理示意图 基于上述Mirus强大、高效的专利递转平台设计,在进行多重、多组合筛选、优化及后续验证,独有的智能迭代设计流程,优化转染技术中的每个组分(图3)。Mirus推出一系列经典转染试剂,以应对多种需求:广谱、高性能、低毒性的转染试剂家族: TransIT-X2&reg;、TransIT&reg;-LT1、TransIT&reg;-2020针对特定细胞类型的转染试剂家族:TransIT&reg;-293、TransIT&reg;-BrCa、TransIT&reg;-CHO、TransIT-HeLaMONSTER&reg;、TransIT&reg;-Insect、TransIT&reg;-Jurkat、TransIT&reg;-Keratinocyte针对特定应用的转染试剂家族:- 病毒生产:VirusGEN&reg; 转染试剂及配套试剂盒、TransIT&reg;-Lenti- 蛋白/抗体生产:TransIT-PRO&reg;、CHOgro&reg; Expression System、CHOgro&reg; High Yield Expression System寡核苷酸递转的转染家族:TransIT&reg;-Oligo、TransIT-siQUEST&reg;、TransIT-TKO&reg;mRNA及长链RNA递转:TransIT&reg;-mRNA图3 Mirus独有智能迭代设计,转染试剂优化流程示意图 Mirus TransIT-X2&reg;转染试剂性能数据展示Mirus TransIT-X2&reg;Dynamic Delivery System递转表达EGFP质粒DNA分别至A549、CHO-K1、Hep G2、MDCK、LNCaP、PC-12、原代人乳腺上皮细胞(HMEC)和正常人真皮成纤维细胞(NHDF)细胞中。实验使用96孔板, TransIT-X2&reg;试剂加入量为0.2-0.4µl,DNA加入量为0.1µg(使用试剂:DNA=2:1、3:1或4:1)。转染后48小时,使用Guava&reg; easyCyte? 5HT流式细胞仪重复检测三次,评估转染效率。图4 TransIT-X2&reg;在包括原代细胞在内的多种细胞类型中都具有较高转染效率 使用TransIT-X2&reg;(Mirus Bio)、Lipofectamine&reg;2000 (Thermo Fisher Scientific)或Lipofectamine&reg;3000 (Thermo Fisher Scientific)转染荧光素酶编码质粒DNA至A549 (A)或MDCK (B)细胞中,转染24小时,通过荧光素酶活性评估转染效率,定量受损细胞中释放的LDH评估细胞毒性。与Lipofectamine&reg;2000或Lipofectamine&reg;3000的细胞相比,在最佳试剂:DNA比例下,Trans - x2&reg;有着更高的荧光强度及更低的细胞毒性。图5 相较于使用单一组分且形成阳离子脂质体复合物(liposome)的Lipofectamine&reg;系列转染试剂,TransIT-X2&reg;有着更高的转染效率及更低细胞毒性 实验Tips: 针对更多特定细胞类型,试剂使用建议,详细请见:Cell-type specific transfection protocol recommendations (PDF). Mirus TransIT-X2&reg;在RNAi干扰实验中性能数据展示基因沉默相关功能研究在分子和细胞生物学中发挥着重要作用,化学转染也在该研究领域扮演者重要角色。常见参与RNAi干扰途径的天然RNA分子包括:- 小干扰 RNA (Small interfering RNAs, siRNA) :由双链 RNA(dsRNA)断裂所产生的短双链 RNA(20-25bp);- 微小 RNA(MicroRNAs, miRNAs) :非编码 RNA 处理后所产生的一类短的、单链 RNA(20-22nt)。利用 RNAi 抑制基因表达的另一种方法为短发夹 RNA(short hairpin RNA , shRNA),这些短 RNA 序列可通过病毒或非病毒载体方式进行表达,更多详细信息可查阅Mirus Applications | RNAi Gene Silencing。 图6 不同RNAi干扰途径示意图 TransIT-X2&reg;Dynamic Delivery System和Lipofectamine&reg;2000转染试剂用于转染siRNA(靶点为内源性蛋白质- GAPDH和AHA1),对照使用正常人类真皮成纤维细胞(NHDF)递转非靶向siRNA。Trans IT-X2&reg;加入量为4µl, Lipofectamine&reg;2000加入量为6µl,siRNA加入量都为25 nM。使用qRT-PCR相对于18s rRNA水平测量GAPDH或AHA1 mRNA进行检测,转染后48小时均一化至非靶向对照组的mRNA水平,误差则为三次复孔实验的标准差。图7 基于siRNA核酸递转类型的基因沉默研究,相比Lipofectamine&reg; 2000,TransIT-X2&reg;有着更高的基因沉默效率 TransIT-X2&reg;Dynamic Delivery System和Lipofectamine&reg;2000转染试剂用于转染Pre-miR? hsa-miR-1 miRNA Precursor 或者mirVana? miRNA mimic, miR-1 (两者都已验证,可降低PTK9 mRNA表达水平)。Pre-miR?阴性质控用于评估mRNA表达水平基线值。Trans IT-X2&reg;及Lipofectamine&reg;2000试剂加入量都为3µl, 加入50 nM miRNA。使用qRT-PCR相对于18s rRNA水平,经过阴性质控的均一化,得到PTK9 mRNA表达水平值。图8 基于miRNA (miRNA Precursor及miRNA mimic)基因沉默研究,相比Lipofectamine&reg; 2000,TransIT-X2&reg;有着更高的基因沉默效率 Mirus TransIT-X2&reg;在CRISPR基因编辑实验中性能数据展示经过改造及优化的细菌 CRISPR/Cas9 系统,已被广泛应用到哺乳细胞的基因编辑中。基于CRISPR基因编辑实验常见两组分:Cas9蛋白及引导RNA(gRNA)。当Cas9蛋白切割了靶向基因组DNA,会触发两种内源性修复机制,即非同源末端连接(NHEJ)和同源定向修复(HDR),以应对细胞中产生的DNA断裂。基于NHEJ细胞修复通路,为非精准、且容易出错细胞修复通路,可引入导致基因功能缺失的Indel。基于HDR的细胞修复通路,则需要额外的同源 DNA 作为修复模板,从而实现“精准”修复,在目的基因插入特定的基因或长片段序列。根据研究者们不同的实验需求,CRISPR基因编辑可以有多种类型实验设置,这意味需要面对不同核酸类型的转染甚至共转染,举例如下:1. 质粒pDNA转染作为CRIPSR实验关键两组分:Cas9蛋白及gRNA,可以设计单个质粒DNA,共同表达两组分(A);或者使用两质粒系统,其中一个质粒表达Cas9蛋白,另外一个质粒表达gRNA(B);当使用Cas9切口酶(Nickase),则需要两条gRNA,这时可能需要三质粒系统的递转实验。2. 质粒DNA及RNA寡核苷酸共转染此时,与上述实验设计不同的是,gRNA以寡核苷酸形式进行递转,这就意味着递转实验需要同时转染质粒DNA以及RNA寡核苷酸(A和B)。3. mRNA及RNA寡核苷酸共转染为了避免由于质粒DNA基因组整合而导致的脱靶效应,可以共转染编码Cas9蛋白的mRNA及gRNA (RNA寡核苷酸)。4. Cas9/gRNA RNP复合物递转随着Cas9蛋白及gRNA商品化趋于成熟,越来越多的研究者们选择直接从第三方购买高保真Cas9蛋白,以及有着额外化学修饰且在细胞内更稳定的gRNA寡核苷酸。除了极大的缩短和简化CRISPR实验流程外,相对于质粒或者mRNA方式合成,直接递转RNP复合物的方式有着更高的特异性及编辑效率。实验Tips: 针对上述不同CRISPR实验设计及递转情形,TransIT-X2&reg; Dynamic Delivery System经优化的具体实验说明, 下载链接如下:TransIT-X2&reg; for CRISPR Plasmid + gRNA Delivery (PDF) TransIT-X2&reg; for CRISPR Plasmid Delivery (PDF) TransIT-X2&reg; for CRISPR RNP + ssODN Delivery (PDF) TransIT-X2&reg; for CRISPR RNP Delivery (PDF)使用TransIT-X2&reg; Dynamic Delivery System (2 µl/孔,24孔板, Mirus Bio)共转染0.5 µg质粒DNA(表达Cas9蛋白)及50nM 2-part gRNA (PPIB基因)至HEK293T/17, U2OS 及NHDF细胞中,转染后48小时,T7E1验证切割效率。图9 质粒DNA和gRNA寡核苷酸共转染:TransIT-X2&reg;分别在293T/17、U2OS和NHDF细胞中共转Cas9质粒DNA与gRNA(RNA寡核苷酸),都有着较高的基因编辑效率(18-48%) 2-part gRNA (PPIB基因,IDT) 及Cas9 蛋白(PNA Bio)形成RNP复合体,分别使用TransIT-X2&reg; Dynamic Delivery System(1 µl/孔, Mirus Bio)、Lipofectamine&reg; CRISPRMAX? (1.5 µl/孔, ThermoFisher) 、Lipofectamine&reg; RNAiMAX (1.5 µl/孔, ThermoFisher) 、Lipofectamine&reg; 3000 (1.5 µl/孔ThermoFisher) 递转至293T/17及U2OS细胞中。测试gRNA两种使用量(6 nM或12 nM),相同Cas9 蛋白加入量(6 nM),转染后48小时,T7E1验证切割效率。图10 Cas9/gRNA RNP复合体递转:相较于Lipofectamine&reg;系列转染试剂,TransIT-X2&reg;有着更高的切割效率 Mirus TransIT-X2&reg;产品优势?新型基于多组分开发的广谱型转染试剂(适用于多种细胞,包括难转细胞);? 可同时转染核酸及蛋白,包括不限于DNA,siRNA/miRNA和CRISPR/Cas9复合物;?不形成脂质体复合物,降低细胞毒性;? 满足多种应用:基因过表达、基因沉默、基因编辑、干细胞研究、稳转细胞株构建等。 相关产品信息产品名称规格货号TransIT-X2&reg; Dynamic Delivery System1 × 0.3 mlMIR 60031 × 0.75 mlMIR 60041 × 1.5 mlMIR 60005 × 1.5 mlMIR 600510 × 1.5 mlMIR 6006 文末福利:关注全网最大下注平台微信公众号“xmjsci”,回复关键词“X2试用”,填写信息即有机会免费获取100μl TransIT-X2&reg;转染试剂试用装。试用成功后还可享优惠折扣购买TransIT-X2&reg;正装哦,快来试用抢购吧!美国Mirus公司成立于1995年,是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的公司,同时也是目前该类试剂主要的供应商之一。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者,其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。全网最大下注平台是Mirus中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣,欢迎致电北京全网最大下注平台客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。 更多>

大/小鼠钙结合蛋白S100A8/S100A9检测试剂盒

S100A8 / S100A9(MRP(8/14)是一种钙结合蛋白,由中性粒细胞和单核细胞分泌而成,粪便中S100A8 / S100A9是赘生性和炎症性胃肠疾病的标志物,一般情况下很难区分肠易激综合症和慢性炎症性肠病,所以很多时候会导致广泛和不必要结肠镜检查,而S100A8 / S100A9检测可以使两组患者明确区分。将该标记物与结肠直肠癌的标准粪便潜血筛查进行比较,能够清楚地证明了粪便S100A8 / S100A9测试的诊断优势,该参数具有较高的诊断价值:如果粪便中的S100A8 / S100A9水平较低,则很可能不存在器质性疾病。Immundiagnostik(IDK)公司能提供大/小鼠钙结合蛋白S100A8/S100A9检测试剂盒(酶联免疫法) ,用于定量大/小鼠粪便、血清、尿液、组织提取液及细胞培养上清液中的S100A8/S100A9(钙卫蛋白MRP8/14 )。货号KR 6936品名S100A8/A9(MRP8/14, Calprotectin, Mouse/Rat) ELISA规格96tests孵育时间1h/1h/1h/5-15min样本类型大/小鼠粪便,血清,尿液,组织提取液样本量100µl/100mg校准品0.25-15.6ng/ml方法酶联免疫法 品牌IMMUNDIAGNOSTIK储存条件2-8℃产品说明说明书下载相关文献Hildebrand, F. et al., 2013. Inflammation-associated enterotypes, host genotype, cage and inter-individual effects drive gut microbiota variation in common laboratory mice. Genome biology, 14(1), p.R4.Nelson, D. a et al., 2012. An expanded myeloid derived suppressor cell population does not play a role in gammaherpesvirus-exacerbated breast cancer metastases. Infectious agents and cancer, 7(1), p.22. Manual S100A8/S100A9 (MRP8/14) 24Prinzen, C. et al., 2009. Differential gene expression in ADAM10 and mutant ADAM10 transgenic mice. BMC genomics, 10, p.66.Soro-Paavonen, A. et al., 2008. Receptor for advanced glycation end products (RAGE) deficiency attenuates the development of atherosclerosis in diabetes. Diabetes, 57(9), pp.2461–2469.Volz, H.C. et al., 2012. S100A8/A9 aggravates post-ischemic heart failure through activation of RAGE-dependent NF-κB signaling. Basic research in cardiology, 107(2), p.250.Wiechert, L. et al., 2012. Hepatocyte-specific S100a8 and S100a9 transgene expression in mice causes Cxcl1 induction and systemic neutrophil enrichment. Cell communication and signaling : CCS, 10(1), p.40.Yamamoto, Y. et al., 2011. Septic shock is associated with receptor for advanced glycation end products ligation of LPS. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950), 186(5), pp.3248–57.全网最大下注平台为Immundiagnostik(IDK)中国代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打全网最大下注平台客服电话400-050-4006或者登陆网站 更多>

植物组培抗生素选择指南

植物组织培养中一部分抗生素被用于去除或者抑制微生物生长,如青霉素、氯霉素、利福平等;另一部分用于抗性筛选的抗生素,如潮霉素B、G418、双丙氨膦等,他们大多数能够抑制或者干扰某些重要蛋白质的合成,可以在含有这些抗生素的培养基中筛选得到目的植株的阳性克隆。每种抗生素的抑菌谱不同,不同的植物对抗生素表现出不同的敏感性。例如,一种抗生素对某些植物的毒性很小,而对其他物种的毒性是极大的。所以没有固定推荐的使用浓度,建议抗生素在使用之前,应该对样本相对于抗生素的敏感性进行预实验,确定药物使用最佳浓度和最佳作用时间,然后开展正式的实验。一般来说,抗生素需要储存在冰箱中。氨基糖苷类抗生素(如卡那霉素)具有吸湿性,应储存在干燥器中。所有抗生素都应不受阳光直射。利福平和两性霉素B对光非常敏感,应该储存在黑暗中。多数抗生素对热敏感,需要过滤灭菌,最好是现用现配,尽量减少溶液反复冻融次数,防止抗生素失效。 羧苄青霉素(货号:C346) 羧苄青霉素是一种白色至灰白色、吸湿性粉末,可溶于水。羧苄青霉素对革兰氏阴性菌最有效,但对革兰氏阳性菌也有一定的作用。据报道,羧苄青霉素水溶液在35℃、pH 5.5下稳定40小时。溶液可以在-20℃储存24个月。羧苄青霉素对多种植物的毒性相对较低,据报道,在植物组织培养中使用的浓度可高达1000 mg/L。头孢噻肟钠(货号:C380) 头孢噻肟钠是一种白色到灰白色的粉末,可以溶于水。新制备的溶液颜色的变化并不一定表明效力的变化。需储存在一个防光的密封容器中。头孢噻肟钠的水溶液在pH值范围为4.3-6.2时最为稳定。溶液可在-20°C下保存48个月。头孢噻肟钠对革兰氏阴性菌最有效。 潮霉素B(货号:H370) 潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素,对原核微生物和真核微生物和细胞均有效。推荐浓度范围为10 - 400µg/mL。原液可在2-6℃下储存至少1年;溶液不应冷冻,因为这样会降低其效力。 上述小编只是简单介绍了下常用抗生素的基本性能,下方小编总结了PhytoTech Labs部分常见抗生素的分子量、抗性等特性,方便广大植物学客户选择: 品名 货号 分子量 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 分枝杆菌 真菌 支原体 植物毒性浓度2 溶剂 两性霉素B A119 924.1 ++ >5 DMSO 氨苄青霉素 A116 371.4 ++ ++ 100 Water 羧苄青霉素 C346 422.4 + ++ >1000 Water 头孢噻肟钠 C380 477.4 + ++ >100 Water 头孢氨苄 C1970 365.4 ++ + Water 氯霉素 C252 323.1 ++ ++ + + 1-64 EtOH G418 G810 692.7 50 Water 硫酸庆大霉素 G570 575.7 + ++ ++ 80 Water 潮霉素B H370 527.5 20-400 Water 卡那霉素 K378 582.6 ++ ++ ++ 2 Water 多粘菌素B P6809 1385.6 ++ Water 利福平 R501 822.9 ++ ++ ++ 100 Water 壮观霉素 S742 405.3 + ++ 500 Water 硫酸链霉素 S739 1457 ++ ++ 16 Water 特美汀 T869 NA ++ 200 Water 盐酸万古霉素 V870 1485 ++ 80 Water 注:1、+ + =对大多数微生物有效,+ =对某些微生物有效 2、由于不同种类的植物对抗生素的毒性敏感性存在很大差异,表中所示的植物毒性浓度可能会更高或更低。 全网最大下注平台代理的PhytoTech Labs是美国知名的植物培养基供应商,公司从1997年成立不断发展壮大,现已服务于全世界研究院所及生产研发企业。PhytoTech Labs通过ISO 9001:2000质量体系认证,所有产品按照cGMP标准生产和包装,生产过程受到严格质量控制,每个产品的物理学、化学、生物学特性都经过了严格检测,并经过组织培养检测。产品线包含植物组培培养基、植物凝胶、生长调节剂、抗生素和常见生化试剂。 全网最大下注平台做为PhytoTech Labs中国区总代理,拥有成熟的服务体系和现货库存,若您对更多产品感兴趣欢迎拨打全网最大下注平台全国客服热线400-050-4006,或者登陆官方网站www.xmjsci.com查询产品详细信息。 更多>

新品上市 | 舟帆生物CE-SDS纯度检测试剂盒

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Pfanstiehl 喜获第13个CDE登记号- L-甲硫氨酸

“ 热烈祝贺Pfanstiehl 2023年新品L-甲硫氨酸喜获CDE登记号F20230000456. 这是Pfanstiehl产品获得的第13个CDE登记号!”治疗性蛋白质的稳定性受多种因素的影响,包括环境条件、制剂配方等,如温度、光照、离子浓度、pH值以及表面活性剂、糖和其他辅料等[1]。治疗性蛋白质在生产和储存过程中容易发生氧化,进而发生聚集、错误折叠、溶解等一系列变化,使其正常生物学功能受到影响,最终引发免疫原性反应[2]。甲硫氨酸是一种稳定的抗氧化剂,通常添加在治疗性蛋白质制剂配方中,溶液中游离的甲硫氨酸能有效保护治疗性蛋白质分子上对氧化敏感的氨基酸残基[3]。在含有透明质酸酶的制剂配方中,甲硫氨酸能有效防止透明质酸酶的氧化。与其他氨基酸或糖相比,甲硫氨酸是预防蛋白质发生光诱导氧化最有效的辅料之一[4]。Pfanstiehl秉承一贯高品质理念,2023年重磅推出的GMP注射级别L-甲硫氨酸, 具有高纯度,超低内毒素,超低β-glucan,超低微生物含量, 超低金属杂质残留(ppb级别)的特点,符合多国药典规定(USP, EP, BP, ChP),可用于生物治疗性药物和疫苗的生产。产品信息:产品名称: L-Methionine, High Purity, Low Endotoxin, Low Metals中文名称:L-甲硫氨酸分子式:CH3SCH2CH2CH(NH2)CO2H分子量:149.21产品货号:M-168产品特点:高纯度,低内毒素,低微生物含量,低β-glucan,低金属杂质残留符合多国药典:USP, EP, BP, JP, ChP符合ICH Q3D标准符合GMP标准植物源CDE登记号: F20230000456产品应用:蛋白药物抗氧化剂,稳定剂 [1] M.E. Krause, et al. Curr. Opin. Biotech., 60 (2019)[2] ArnaudFevre, et al.Journal of Chromatography B, 1189 (2022)[3] X.M. Lam, et al., J. Pharm. Sci., 86 (11) (1997)[4] D.D. Shah, et al.,Int. J. Pharmaceut., 547 (1-2) (2018)如果您对Pfanstiehl的L-甲硫氨酸感兴趣,可联系Pfanstiehl 中国区代理全网最大下注平台获得详细的产品概况说明文件如下,也欢迎联系获取测试样品。Pfanstiehl产品目录:全网最大下注平台为Pfanstiehl中国代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打全网最大下注平台客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>

Pfanstiehl产品注射级组氨酸(H-116)

Pfanstiehl生产的注射级超纯L -组氨酸,是专为生物制药生产而设计,具有高纯度,低内毒素含量,低菌落检出数量(100 cfu/g),低重金属杂质含量的特点,检测了ICH Q3D中规定的重金属检项,其浓度低至十亿分之一(ppb)。产品信息:产品货号:H-116 中文名称:组氨酸 产品名称:L-Histidine, High Purity / Low Endotoxin-Low Metals 分子式:C6H9N3O2 分子量:155.15 g/mol CAS No.:71-00-1 CDE No.:F20200000338 DMF/CBER:24940 ? 产品特点:高纯度,低内毒素,低金属杂质残留 符合多国药典:USP, EP, BP, JP, ChP 符合ICH Q3D标准 符合GMP标准 美国DMF和中国CDE药用辅料登记工作已完成 产品应用:蛋白质稳定 疫苗配方 液体和冻干配方 细胞冻存 培养基优化等 如果您对Pfanstiehl新产品感兴趣,请联系全网最大下注平台申请样品试用。 Pfanstiehl产品目录: Pfanstiehl致力于为全球生物制剂公司提供高质量注射级药用辅料,主要产品包括注射级海藻糖(T-104-4)、蔗糖(S-124-2-MC和S-124-1-MC)、甘露醇(M-109-7)、六水琥珀酸钠(D-161)、组氨酸(H-116)、组氨酸盐酸盐(H-117)、精氨酸(A-170)、精氨酸盐酸盐(A-171)等,并已获得CDE药用辅料注册号,其中海藻糖和蔗糖已经处于激活状态。 全网最大下注平台为Pfanstiehl中国代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。欢迎拨打全网最大下注平台客服电话400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。 更多>

高质量的p53抗体,有助于推进癌症研究

每个人体内都存在一个关键的基因——TP53,其作用是确保细胞的正常生长与分裂,从而防止癌症的发生。TP53基因所编码的蛋白就是广为人知的p53蛋白。这种蛋白在人体内由393个氨基酸组成,其中5-28位的氨基酸序列构成了p53的转录激活区(下图中的黄色部分);而95-289位的氨基酸序列则构成了p53与DNA结合的结构域(下图中的蓝色部分)。 TP53基因,也称为p53,是一种抑癌基因,其编码的p53蛋白在细胞凋亡过程中起关键作用,通过介导癌细胞的凋亡过程来实现抑癌作用。TP53基因是易突变和重要的肿瘤抑制基因之一,因此对TP53基因的研究具有重要意义。根据p53数据库http://p53.iarc.fr/,TP53基因已发现超过1500种突变,其中六个热点突变位点(175, 245, 248, 249, 273和282)占所有p53突变的近28%。 p53蛋白调控机理 p53蛋白在多种组织中都有表达,参与调控细胞的生长、复制和凋亡等过程。TP53基因在超过50%的癌症患者中发生突变或缺失。在转移的癌细胞中,经常发现错义突变的p53蛋白,这些突变的蛋白比正常的p53蛋白更稳定,并在细胞核内累积。突变p53蛋白的表达水平高于正常细胞中的p53蛋白寿命,且表达水平较高。在经历基因损伤或致癌基因激活时,许多肿瘤细胞表达高水平的突变p53蛋白。 在众多调控通路中,磷酸化对p53蛋白活性的调节起关键作用。当DNA损伤温和且短暂时,p53主要发挥促进生存(pro-survival)功能,比如促进细胞周期停滞,促进DNA修复,降低活性氧,提高能量供应等。当DNA损伤难以修复时,p53则会促进死亡(pro-death)的模式,比如诱导细胞衰老,凋亡或者铁死亡等。因此,p53在癌症发生发展过程中起着重要的作用,是重要的肿瘤抑制因子。 在癌症研究领域的相关产品 癌症研究领域,科学家们已经研发出许多与p53蛋白相关的产品。主要的研究策略是降解突变体p53或改造突变体p53的蛋白折叠,以恢复野生型p53的构象和功能。虽然科学家们在药物研发方面取得了一些进展,但截至目前,仍没有一款靶向p53的抗癌新药成功上市。尽管如此,针对该领域药物开发的研究仍然备受关注。据Nature杂志2017年的一项统计显示,TP53基因位列过去几十年最热门的研究基因榜首。 全网最大下注平台代理的Nordic-MUbio品牌提供了大量与p53蛋白相关的抗体产品,这些产品在癌症领域的研究中发挥着重要作用。这些抗体的研究方向涵盖了细胞周期、癌症、细胞结构、肿瘤学、细胞凋亡、感染性疾病、CD maker、细胞粘连、酶、细胞外基质和干细胞等多个领域。为了方便客户进行搜索,小编整理了部分与p53蛋白相关的抗体产品列表: Field of interest:Cancer Field of interest:Cell cycle Field of interest:Cellular structures Field of interest:Apoptosis Nordic成立于1964年,专注于免疫学领域的研究,已有超过1700种针对人类、小鼠、猴子和大鼠免疫球蛋白类及其亚类的特异性抗血清。此外,他们还提供广泛的针对不同动物种类的多克隆抗血清。几乎所有的抗体都经过荧光标记和辣根过氧化物酶标记,并可根据客户需求进行生物素标记。MUbio品牌由荷兰马斯特里赫特大学于2000年创立,自那时以来已成功开发了500种抗体产品,其中许多都是该公司的独特克隆产品。2013年,Nordic收购了MUbio,并将其更名为Nordic-MUbio。公司的重要资产之一是不同物种抗体之间的交叉反应,这尤其有助于药物研发中的斑马鱼模型研究。同时,Nordic-MUbio还在研究、测试和验证用于不同领域诊断的抗体和抗原。所有产品均按照严格的ISO 9001:2008标准生产,Nordic-MUbio品牌目前已被Absolute Biotech公司收购。 Absolute Biotech是一家集成了多个生命科学品牌的公司,专门从事抗体试剂和服务。品牌包括Absolute antibody、LSBio、Kerafast、Exalpha、Nordic-MUbio和Everest。公司提供全方位的抗体相关产品、服务和专业知识,用于研究、诊断和治疗应用。其中,癌症研究相关试剂包括免疫治疗抗体、生物类似药和肿瘤标志物等;神经科学研究相关试剂包括β-淀粉样蛋白抗体、神经退行性疾病研究工具和关键神经递质受体抗体等;病毒学研究相关试剂包括重组工程抗体、SCICONS dsRNA抗体、山羊多克隆抗体、ELISA试剂盒、蛋白及质粒等。Absolute Biotech的使命是成为全球客户的“抗体匠人”,为科学家提供独特且定制的试剂。 全网最大下注平台作为Absolute Biotech品牌及下属各品牌的中国区授权代理,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如果您对产品感兴趣,欢迎拨打全网最大下注平台全国服务热线400-050-4006,或登录网站www.xmjsci.com咨询订购。 更多>

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